一、細胞大小測定也稱(chēng)顯微測微實(shí)驗, 主要是利用目鏡測微尺和鏡臺測微尺配合使用對細胞大小進(jìn)行測定。
A:鏡臺測微尺:是一種特制的載玻片,中央有一個(gè)全長(cháng)1 mm 的刻度標尺,將1 mm 等分成100 個(gè)小格,每格長(cháng)度為10 μm,用它來(lái)校正標定目鏡測微尺每小格的長(cháng)度。
B:目鏡測微尺:是一塊可放在目鏡內的圓形薄片,中央有刻度,并被分為50 小格,每小格的長(cháng)度隨物鏡放大倍數的大小而變動(dòng)。測量細胞大小之前,預先用鏡臺測微尺來(lái)標定某一物鏡放大倍數下目鏡測微尺每小格所代表的實(shí)際長(cháng)度,再以它作為測量細胞的尺度。
二、細胞計數實(shí)驗利用血球計數板進(jìn)行操作,其構造和計數原理是整個(gè)實(shí)驗的關(guān)鍵。
血球計數板:
由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成,玻片中有4 條下凹的槽,構成3 個(gè)平臺。中間的平臺較寬,其中間又被一短橫槽隔為兩半,每半邊上面刻有一個(gè)方格網(wǎng)。方格網(wǎng)上刻有9 個(gè)大方格,其中只有中間的一個(gè)大方格為計數室,供計數用。這一大方格的長(cháng)和寬各為1 mm,深度為0.1 mm,其體積為0.1 mm3。經(jīng)過(guò)恰當稀釋的細胞懸液,加到血球計數板的計數室中,在顯微鏡下逐格計數,由于計數室的容積是固定的,故可將在顯微鏡下計得的菌體細胞數換算成單位體積的細胞數量, 經(jīng)過(guò)此方法可測得樣品中細胞總和。
三、實(shí)驗注意事項:
1)利用小方格邊長(cháng)50 μm 進(jìn)行標定目鏡測微尺時(shí),易產(chǎn)生2 種不同的結果。有些人目鏡測微尺兩端重疊時(shí)用的是靠近中方格的小方格,而計數室的特點(diǎn)就是中方格的邊緣線(xiàn)都為雙線(xiàn), 靠近中方格的小方格的一邊也為雙線(xiàn),導致結果不一致。所以要正確的利用單線(xiàn)小方格的邊長(cháng)進(jìn)行標定目鏡測微尺。
2)充分利用血球計數板, 不僅利用其小方格邊長(cháng)的固定值,同時(shí)也利用其充當載玻片,在計數室內進(jìn)行細胞計數,在計數室內外都可以進(jìn)行細胞大小的測定。
3)細胞大小測定時(shí),觀(guān)察酵母細胞應選擇代表性的細胞, 不要選擇剛剛出芽脫落下來(lái)的幼齡酵母,也不要選擇有明顯吸水膨脹的老齡酵母,觀(guān)察時(shí)一般選擇5~10 個(gè)典型酵母細胞求平均值。
4)細胞計數時(shí)應避免重復計數, 減少誤差, 嚴格按照“ 計左不計右,計上不計下” 的原則, 遇到有出芽的酵母, 只有當芽體與母細胞一樣大時(shí)計為2 個(gè)。
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