1 問(wèn):PanaceaGel是什么?
答:PanaceaGel是化學(xué)合成的肽水凝膠,PH為中性。該凝膠為透明、生物可降解、3D網(wǎng)絡(luò )支架,不包含任何生物來(lái)源的成分,小瓶盛裝。
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2 問(wèn):PanaceaGel是什么材質(zhì)的?
答:PanaceaGel100%是由13個(gè)天然氨基酸化學(xué)合成的肽。原子力顯微鏡(AFM)和電鏡(SEM,TEM)觀(guān)察也發(fā)現,水溶液中小肽根據天然3D網(wǎng)狀結構自發(fā)組裝成納米纖維。由合成肽和碳酸鈉調節水凝膠PH值,約8.5%的海藻糖作為等滲試劑調節滲透壓。
3 問(wèn):PanaceaGel剛性如何?
答:隨著(zhù)肽濃度和混合物中鹽濃度變化,PanaceaGel剛性不斷變化。培養細胞分泌的細胞外基質(zhì)也會(huì )影響其機械強度。例如流變學(xué)測量顯示,以2:1的比例混合PanaceaGel(0.4%)和DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium),儲能模量(G’)和損耗模量(G’’)分別為97.0 ± 2.1 Pa 和 15.3 ± 1.4 Pa。
4 問(wèn):PanaceaGel需要滅菌么?
答:發(fā)貨前PanaceaGel已經(jīng)經(jīng)過(guò)高壓滅菌。無(wú)需進(jìn)一步滅菌。
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5 問(wèn):如何儲存PanaceaGel?
答:PanaceaGel需在4-25℃避光保存。
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6 問(wèn):室溫條件下PanaceaGel穩定性如何?
答:未開(kāi)封的PanaceaGel在4-25℃時(shí)保存在黑暗處能放置6個(gè)月。長(cháng)期穩定性研究正在進(jìn)行中。
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7 問(wèn):PanaceaGel應用于細胞懸液時(shí)需進(jìn)行任何預處理么?
答:不需要。PanaceaGel的PH為中性,所以用于細胞懸液時(shí)無(wú)需再平衡。二者極易混合,但液體混合時(shí)一定要迅速,因為PanaceaGel只要暴露于培養基中的鹽中流動(dòng)性就會(huì )大大降低。
8 問(wèn):PanaceaGel能用于何種細胞?
答:已經(jīng)使用PanaceaGel成功培養了以下細胞:
小鼠骨骼肌細胞(C2C12)
大鼠骨骼肌細胞(L6)
小鼠成纖維細胞(NIH3T3)
人成纖維細胞(TIG-1)
人軟骨肉瘤細胞(OUMS-27)
新生的心肌細胞(直接分離得到)
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9 問(wèn):PanaceaGel和其他細胞三維培養材料有何異同?
答:參考下表
|
PanaceaGel |
膠原Collagen |
生物可降解聚合物
Biodegradable polymer |
來(lái)源 |
合成 |
動(dòng)物源性 |
合成 |
剛性 |
中等 |
中等 |
硬 |
PH |
中性 |
中性、酸性 |
中性 |
生物親和性 |
良好 |
極佳 |
良好 |
透明度 |
高 |
高 |
低 |
10 問(wèn):實(shí)驗中如何選擇PanaceaGel使用濃度?
答:有兩種濃度的PanaceaGel,分別為0.4%和0.8%。初始實(shí)驗,推薦將0.4%的PanaceaGel和細胞懸液以1:1的比例等體積混合,獲取PanaceaGel終濃度為0.2%。0.8%的PanaceaGel能用于制作更高硬度的水凝膠。根據細胞類(lèi)型不同,PanaceaGel和細胞的最佳密度也不同。
11 問(wèn):在PanaceaGel中如何培養細胞?
答:參考試驗步驟。
12 問(wèn):使用PanaceaGel時(shí)需要特殊裝置么?
答:不需要
13 問(wèn):最佳生長(cháng)條件和限制是什么?
答:細胞終濃度為5×105~1×106cells/mL,對大多數類(lèi)型細胞都可以選擇普通培養基。PanaceaGel 3D培養細胞厚度不超過(guò)2mm。
14 問(wèn): PanaceaGel用過(guò)的細胞能再次培養么?
答:可以。破壞支架后通過(guò)移液能釋放細胞并再次培養。
15 問(wèn):如何將生物活性物質(zhì)整合到PanaceaGel中(小肽,生長(cháng)因子等)?
答:生物活性物質(zhì)能添加到培養基或細胞懸液中。如果加入培養基中,生物活性物質(zhì)必須在30分鐘內浸潤并抵達細胞。若添加到細胞懸液中,需保持生物活性物質(zhì)最適濃度。
16 問(wèn):能否在PanaceaGel表面培養細胞?
答:可以。添加細胞懸液前,PanaceaGel能包被培養皿、插件、孔板或其他細胞培養盤(pán)。加入細胞懸液時(shí)操作要輕柔,避免攪動(dòng)。
17 問(wèn):PanaceaGel 3-D培養的細胞下游分析有哪些?
答:我們已成功進(jìn)行過(guò)以下實(shí)驗:
-用DAPI 或PI或鈣黃綠素染細胞測免疫活性
-熒光試劑染色后進(jìn)行DNA 計數
-Western blot分析
-免疫染色
-SEM
-TEM
18 問(wèn):PanaceaGel3D 培養的細胞能移植到體內進(jìn)行分析么?
答:滿(mǎn)載細胞的PanaceaGel能植入活體動(dòng)物組織中,進(jìn)行專(zhuān)門(mén)活體研究。PanaceaGel本身是生物可降解的,體外研究中表明無(wú)毒性。
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